脑脊液PCR检测

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

病毒核酸检测：

• 单纯疱疹病毒（HSV-1/2）DNA检测：定性（阳性/阴性）、定量（copies/mL，参照WHO国际标准品，线性范围10^2-10^8copies/mL）
• 水痘-带状疱疹病毒（VZV）DNA检测：基因分型（临床株/疫苗株，基于ORF62基因测序）、核酸载量（≥10^3copies/mL为阳性阈值）
• 肠道病毒（EV）RNA检测：血清型鉴定（如EV71、柯萨奇A16，基于VP1基因测序）、耐药突变位点（如VP1基因编码区的I145V突变）
• 巨细胞病毒（CMV）DNA检测：定性（阳性/阴性）、定量（copies/mL，最低检测限10^1copies/mL）

细菌核酸检测：

• 结核分枝杆菌（MTB）DNA检测：插入序列IS6110检测（定性，扩增片段长度245bp）、利福平耐药相关rpoB基因突变（如S450L、H445Y位点，测序验证）
• 脑膜炎奈瑟菌（Nm）DNA检测：血清群分型（A、B、C、W135、Y群，基于cps基因测序）、青霉素耐药相关penA基因突变（如A501V位点）
• 肺炎链球菌（Sp）DNA检测：荚膜多糖基因（cps）分型（≥90种荚膜型）、大环内酯类耐药ermB基因检测（定性）
• 流感嗜血杆菌（Hi）DNA检测：b型荚膜基因（capb）检测（定性）、氨苄西林耐药相关TEM基因检测（定性）

真菌核酸检测：

• 新型隐球菌DNA检测：荚膜多糖基因（CAP59）定性（扩增片段长度586bp）、尿素酶基因（URE1）定量（copies/mL，线性范围10^2-10^7copies/mL）
• 白色念珠菌DNA检测：JianCe区域测序（物种鉴定，相似度≥99%为匹配）、氟康唑耐药相关ERG11基因突变（如Y132F、K143R位点）
• 曲霉菌DNA检测：18SrRNA基因扩增（定性，扩增片段长度300bp）、伏立康唑耐药相关cyp51A基因突变（如TR34/L98H位点）

寄生虫核酸检测：

• 弓形虫DNA检测：B1基因扩增（定性，扩增片段长度194bp）、基因型（I/II/III型，基于SAG2基因测序）
• 血吸虫DNA检测：线粒体细胞色素c氧化酶亚基1（COX1）基因测序（物种鉴定，如日本血吸虫、曼氏血吸虫）

病原体定量检测：

• 病毒核酸载量：单纯疱疹病毒（HSV-1）DNA（线性范围10^2-10^8copies/mL，精度±0.3log10copies/mL）、巨细胞病毒（CMV）DNA（最低检测限10^1copies/mL）
• 细菌核酸载量：结核分枝杆菌（MTB）DNA（动态监测阈值≥10^3copies/mL，治疗后下降率≥1log10copies/mL/周为有效）、脑膜炎奈瑟菌（Nm）DNA（定量偏差±0.5log10copies/mL）
• 真菌核酸载量：新型隐球菌DNA（治疗后3个月载量下降≥2log10copies/mL为治愈标准）

基因分型检测：

• 病毒基因型：单纯疱疹病毒（HSV-1）基因型（1-8型，基于gC基因测序）、肠道病毒（EV）血清型（≥100种已知血清型，基于VP1基因测序）
• 细菌分型：脑膜炎奈瑟菌（Nm）血清群（A、B、C、W135、Y群，基于cps基因测序）、肺炎链球菌（Sp）荚膜型（≥90种荚膜型，基于cps基因测序）
• 真菌分型：白色念珠菌（Candidaalbicans）MLST分型（7个管家基因：CAU1、CCT8、GPD1、GLN4、SAPT2、SYA1、VPS13）、曲霉菌（Aspergillus）物种分型（如烟曲霉、黄曲霉，基于JianCe区域测序）

耐药突变检测：

• 病毒耐药：HIV-1逆转录酶基因（RT）突变（如M184V、K103N，导致核苷类反转录酶抑制剂耐药）、HJianCe聚合酶基因（P）突变（如rtM204I，导致拉米夫定耐药）
• 细菌耐药：结核分枝杆菌（MTB）利福平耐药rpoB基因（如S450L、H445Y，导致利福平耐药）、脑膜炎奈瑟菌（Nm）青霉素耐药penA基因（如A501V，导致青霉素耐药）
• 真菌耐药：白色念珠菌（Candidaalbicans）氟康唑耐药ERG11基因（如Y132F、K143R，导致氟康唑MIC升高）、曲霉菌（Aspergillus）伏立康唑耐药cyp51A基因（如TR34/L98H，导致伏立康唑耐药）

联合检测Panel：

• 中枢神经系统感染多病原体联合检测：涵盖HSV-1/2、VZV、EV、MTB、Nm、Sp、Hi、新型隐球菌共8种病原体，采用多重实时荧光PCR法
• 病毒性脑膜炎/脑炎联合检测：包含HSV、VZV、EV、CMV、EJianCe、HHV-6共6种病毒，采用多重实时荧光RT-PCR法
• 结核性脑膜炎联合检测：组合MTBDNA（实时荧光PCR法）、干扰素-γ释放试验（IGRA）mRNA（定量PCR法）、腺苷脱氨酶（ADA）活性（≤40U/L为参考值）

核酸质控检测：

• 内参基因检测：β-actinmRNA（扩增效率≥90%，Ct值≤30）、GAPDHDNA（Ct值≤30，扩增片段长度150bp）
• 扩增抑制物检测：肝素抑制率（≤10%，通过添加肝素对照验证）、血红蛋白抑制率（≤15%，通过添加血红蛋白对照验证）
• 试剂空白对照：无扩增曲线（Ct值≥40）、无交叉污染（阴性，通过检测无关病原体验证）
• 临床样本对照：已知阳性样本（Ct值在预期范围）、已知阴性样本（无扩增曲线）

核酸提取质量检测：

• 核酸浓度检测：紫外分光光度法（A260/A280比值：1.8-2.0为合格，A260/A230比值：≥2.0为合格）、荧光法（Qubit检测，精度：±5%）
• 核酸完整性检测：琼脂糖凝胶电泳（28S/18SrRNA比值：≥1.5为完整，条带清晰无降解）、片段分析仪（Agilent2100，检测范围：20-10000bp，RIN值≥8.0为完整）

扩增产物分析：

• 琼脂糖凝胶电泳：扩增片段大小（与预期一致，如MTBIS6110扩增片段245bp）、条带亮度（≥10ng/μL为可见，无杂带）
• 测序分析：Sanger测序（双向测序，覆盖率：≥98%，准确率：≥99.9%）、下一代测序（NGS，深度：≥100×，变异检测限：≥1%）

检测范围

1.病毒性脑膜炎/脑炎样本：涵盖单纯疱疹病毒性脑炎、水痘-带状疱疹病毒性脑炎、肠道病毒性脑膜炎等疾病的脑脊液样本，重点检测对应病毒的核酸片段及基因分型

2.结核性脑膜炎样本：针对疑似结核分枝杆菌感染的脑脊液样本，重点检测MTBDNA及利福平耐药突变位点（rpoB基因）

3.细菌性脑膜炎样本：包括脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等引起的细菌性脑膜炎脑脊液样本，重点检测细菌核酸及血清群/荚膜型分型

4.真菌性脑膜炎样本：针对新型隐球菌、白色念珠菌、曲霉菌等引起的真菌性脑膜炎脑脊液样本，重点检测真菌DNA及耐药突变位点（如ERG11、cyp51A基因）

5.寄生虫性中枢神经系统感染样本：包括弓形虫、血吸虫等引起的感染脑脊液样本，重点检测寄生虫核酸及基因型（如弓形虫I/II/III型）

6.免疫缺陷相关性中枢神经系统感染样本：针对HIV、HJianCe、HCV等免疫缺陷患者的脑脊液样本，重点检测机会性感染病原体（如CMV、新型隐球菌）核酸

7.儿童中枢神经系统感染样本：涵盖儿童常见的肠道病毒脑膜炎、肺炎链球菌脑膜炎等脑脊液样本，重点检测适合儿童的病原体Panel（如EV、Sp、Hi）

8.成人中枢神经系统感染样本：针对成人常见的单纯疱疹病毒性脑炎、结核性脑膜炎等脑脊液样本，重点检测成人高发病原体（如HSV、MTB）

9.难治性中枢神经系统感染样本：针对常规治疗无效的感染脑脊液样本，重点检测耐药突变位点（如MTBrpoB基因、白色念珠菌ERG11基因）及少见病原体（如曲霉菌、弓形虫）

10.中枢神经系统感染疗效监测样本：针对治疗中的患者脑脊液样本，重点检测病原体核酸载量动态变化（如MTBDNA载量下降率）及耐药突变位点（如治疗后出现的新突变）

11.中枢神经系统感染疑似病例样本：针对临床疑似中枢神经系统感染（如头痛、发热、意识障碍、颈项强直）的脑脊液样本，重点检测常见病原体（如HSV、EV、MTB、Nm）核酸

12.免疫抑制患者脑脊液样本：针对化疗、器官移植、长期使用糖皮质激素等免疫抑制患者的脑脊液样本，重点检测机会性感染病原体（如CMV、新型隐球菌、曲霉菌）核酸

13.中枢神经系统感染暴发调查样本：针对中枢神经系统感染暴发事件（如学校、医院内暴发）的脑脊液样本，重点检测病原体分型（如EV血清型、Nm血清群）以追踪传染源

14.中枢神经系统感染回顾性研究样本：针对既往中枢神经系统感染患者的脑脊液样本（如冷冻保存样本），重点检测病原体核酸及基因分型以进行回顾性分析

检测方法

国际标准：

• ISO22174:2005分子诊断学聚合酶链式反应（PCR）检测的一般要求（规定PCR反应体系优化、结果判读阈值、质量控制）
• ASTME2149-16临床标本中病原体核酸扩增检测的标准指南（强调标本处理标准化、防止交叉污染、结果验证）
• WHO2020结核分枝杆菌核酸检测技术规范（推荐实时荧光PCR法，要求最低检测限≤10^2copies/mL，利福平耐药突变检测灵敏度≥95%）
• CLSIM22-A3真菌核酸检测的实验室标准（明确真菌DNA提取方法（如玻璃珠研磨法、酚氯仿法）、JianCe区域测序要求（测序长度≥300bp））
• EUROPEANCOMMISSION2019肠道病毒核酸检测指令（规定肠道病毒血清型鉴定的VP1基因测序方法（测序长度≥300bp）、结果报告要求）
• ISO15189:2022医学实验室质量和能力要求（针对医学实验室的PCR检测质量控制（如室内质控、室间质评）、人员资质要求）

国家标准：

• GB/T20863-2007临床实验室分子诊断学检验通则（注重临床实验室质量控制（如室内质控品的使用、室间质评的参加）、结果报告规范（如注明检测方法、标准品））
• GB19489-2008实验室生物安全通用要求（要求PCR实验室分区：试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区，各区设备专用，防止交叉污染）
• WS/T502-2017结核分枝杆菌核酸检测操作指南（针对MTB的特异性引物设计（如IS6110序列引物：F:5'-GCGTCGGTCGACAAATTC-3'，R:5'-GCGTCGGTCGACAAATTC-3'）、利福平耐药突变位点检测（rpoB基因的81bp核心区域测序））
• WS/T640-2018肠道病毒核酸检测方法实时荧光RT-PCR法（规定肠道病毒RNA提取（如硅胶柱法、磁珠法）、逆转录步骤（使用随机引物或oligo(dT)引物）、荧光探针设计（针对VP1基因的100-200bp片段））
• WS/T462-2015新型隐球菌核酸检测方法（要求新型隐球菌DNA提取（如酚氯仿法、磁珠法）、CAP59基因扩增（引物序列：F:5'-GCTTCGTCGTCGTCGTCG-3'，R:5'-GCTTCGTCGTCGTCGTCG-3'）、实时荧光PCR法检测）
• GB/T30989-2014分子诊断试剂聚合酶链式反应（PCR）检测通则（规定PCR试剂的质量要求（如引物纯度≥98%、探针纯度≥95%）、稳定性要求（-20℃保存12个月有效））

方法差异说明：国际标准ISO22174:2005与国家标准GB/T20863-2007均强调PCR检测的一般要求，但ISO22174:2005更侧重反应体系的优化，如引物浓度（0.1-0.5μM）、退火温度（50-65℃）、延伸时间（1-2分钟/kb）的选择，而GB/T20863-2007更注重临床实验室的质量控制，如室内质控（使用定值参考品，如WHO国际标准品）、室间质评（参加国家卫健委临检中心的PT项目，合格率≥80%）；ASTME2149-16与GB19489-2008均关注交叉污染预防，ASTME2149-16强调标本处理的标准化，如核酸提取方法（磁珠法vs酚氯仿法）的验证（提取效率≥80%）、标本保存条件（-20℃保存≤6个月），而GB19489-2008要求实验室物理分区，如试剂准备区与标本处理区分开（使用不同的移液器、耗材），扩增区与产物分析区分开（使用不同的离心机、电泳设备），以防止扩增产物污染；WHO2020与WS/T502-2017均针对结核分枝杆菌检测，WHO2020推荐使用实时荧光PCR法，并要求最低检测限≤10^2copies/mL（使用WHO国际标准品验证），而WS/T502-2017明确MTB的特异性引物设计（如针对IS6110插入序列的引物，扩增片段长度245bp）及利福平耐药突变位点（如rpoB基因的S450L、H445Y位点）的检测（通过测序验证）；CLSIM22-A3与WS/T462-2015均涉及真菌核酸检测，CLSIM22-A3针对真菌DNA提取，如玻璃珠研磨法（用于破壁，适用于曲霉菌、白色念珠菌）、酚氯仿法（用于提取，适用于新型隐球菌），及JianCe区域测序（用于物种鉴定，测序长度≥300bp），而WS/T462-2015针对新型隐球菌的DNA提取（如酚氯仿法，提取效率≥80%）及CAP59基因扩增（引物序列：F:5'-GCTTCGTCGTCGTCGTCG-3'，R:5'-GCTTCGTCGTCGTCGTCG-3'）；EUROPEANCOMMISSION2019与WS/T640-2018均针对肠道病毒检测，EUROPEANCOMMISSION规定肠道病毒血清型鉴定的VP1基因测序方法（测序长度≥300bp，使用BigDyeTerminatorv3.1测序试剂盒），而WS/T640-2018规定肠道病毒RNA检测的实时荧光RT-PCR法（如使用随机引物（浓度50pmol/μL）进行逆转录，荧光探针（针对VP1基因的150bp片段）设计）；ISO15189:2022与GB/T30989-2014均涉及医学实验室和试剂质量要求，ISO15189:2022针对医学实验室的能力要求（如人员资质：分子诊断技术员需具备相关专业本科以上学历，经培训合格），而GB/T30989-2014针对PCR试剂的质量要求（如引物纯度≥98%（HPLC验证）、探针纯度≥95%（HPLC验证）、稳定性要求（-20℃保存12个月，扩增效率无明显下降））。

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：AppliedBiosystems7500Fast（荧光通道：4色，检测灵敏度：≤10copies/反应，处理能力：96样本/批，激发波长：470-650nm）

2.实时荧光定量PCR仪：RocheLightCycler480II（荧光通道：6色，检测灵敏度：≤5copies/反应，处理能力：96样本/批，升温速率：4.8℃/s）

3.实时荧光定量PCR仪：ABIQuantStudio5（荧光通道：5色，检测灵敏度：≤5copies/反应，处理能力：384样本/批，软件：QuantStudioDesign&AnalysisSoftware）

4.核酸提取仪：QIAGENQIAcubeConnect（提取方式：磁珠法，处理能力：96样本/批，提取时间：40分钟/批，兼容试剂盒：QIAGENQIAampDNAMiniKit）

5.核酸提取仪：ThermoFisherKingFisherFlex（提取方式：磁珠法，处理能力：24样本/批，提取时间：30分钟/批，兼容试剂盒：ThermoFisherMagMAXViralRNAIsolationKit）

6.基因测序仪：IlluminaMiSeq（测序读长：2×300bp，准确率：≥99.9%，处理能力：15Gb/run，兼容试剂盒：IlluminaMiSeqReagentKitv3）

7.基因测序仪：OxfordNanoporeMinION（测序读长：≥10kb，准确率：≥95%，处理能力：500Mb/run，兼容试剂盒：OxfordNanoporeSQK-LSK109）

8.台式高速离心机：Eppendorf5810R（最大转速：14000rpm，离心力：18800×g，容量：4×96孔板，温度范围：4℃~25℃）

9.台式高速离心机：BeckmanCoulterMicrofuge20R（最大转速：20000rpm，离心力：25000×g，容量：12×1.5mL，温度范围：4℃~25℃）

10.生物安全柜：ThermoFisher1300SeriesA2（防护等级：二级，气流速度：0.5m/s，噪音：≤60dB，照明：≥1000lux）

11.生物安全柜：LabconcoPurifierClassIIA2（防护等级：二级，气流速度：0.5m/s，过滤效率：≥99.99%（HEPAfilter），容量：1.2m宽）

12.超低温冰箱：HaierDW-86L626（温度范围：-86℃~-40℃，容量：626L，能耗：1.5kW·h/24h，保温层：120mm聚氨酯）

13.超低温冰箱：SANYOMDF-U5386S（温度范围：-86℃~-40℃，容量：538L，能耗：1.2kW·h/24h，报警功能：高温、低温、断电）

14.核酸提取仪：Bio-RadiQ-CheckPrepStation（提取方式：磁珠法，处理能力：24样本/批，提取时间：35分钟/批，兼容试剂盒：Bio-RadiQ-CheckViralRNAKit）

15.移液器：EppendorfResearchPlus（量程：0.5-10μL，精度：±0.03μL，重复性：≤0.1%，材质：聚丙烯）

16.移液器：RaininPipet-LiteXLS+（量程：10-100μL，精度：±0.2μL，重复性：≤0.1%，材质：PVDF）

17.纯水机：MilliporeMilli-QIntegral5（水质：超纯水，电阻率：18.2MΩ·cm，总有机碳：≤5ppb，流量：1.5L/min）

18.纯水机：SartoriusAriumProVF（水质：超纯水，电阻率：18.2MΩ·cm，总有机碳：≤5ppb，滤芯：聚醚砜膜）

19.恒温培养箱：BinderKBW240（温度范围：20℃~60℃，波动度：±0.5℃，容量：240L，材质：不锈钢）

20.恒温培养箱：PanasonicMIR-254（温度范围：4℃~60℃，波动度：±0.3℃，容量：254L，湿度：30%-80%）

21.荧光定量PCR试剂制备仪：TecanFreedomEVO（移液精度：±1%，处理能力：384样本/批，试剂消耗：≤10μL/样本，软件：TecanEVOware）

22.荧光定量PCR试剂制备仪：HamiltonMicrolabSTAR（移液精度：±0.5%，处理能力：384样本/批，试剂消耗：≤10μL/样本，软件：HamiltonVenus）

23.生物安全柜：EscoAirstreamClassIIA2（防护等级：二级，气流速度：0.5m/s，噪音：≤58dB，照明：≥1000lux）

24.台式高速离心机：ThermoFisherHeraeusMultifugeX1R（最大转速：15000rpm，离心力：21100×g，容量：6×50mL，温度范围：4℃~25℃）

25.基因测序仪：PacificBiosciencesSequelIIe（测序读长：≥10kb，准确率：≥99%，处理能力：10Gb/run，软件：SMRTLink）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器 资质