细胞重金属毒性预测模型检测

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

细胞毒性检测：

• 细胞存活率：IC50值测定（范围0.1-100μM，参照ISO10993-5）
• LDH释放检测：释放率≥20%判定显著损伤（精度±5%）
• 膜完整性：台盼蓝拒染率（存活率≥95%）

氧化应激指标：

• ROS水平：相对荧光强度变化（倍数，DCFH-DA探针法）
• GSH含量：还原型谷胱甘肽浓度（μmol/mg蛋白，检测限0.1μM）
• SOD活性：超氧化物歧化酶活力（U/mg蛋白，参照ASTME2523）

炎症因子分析：

• TNF-α浓度：表达水平（pg/mL，ELISA法）
• IL-6表达：mRNA相对量（Log2FC变化）
• NF-κB激活：核转位百分比（荧光显微镜观测）

凋亡检测：

• 凋亡率：AnnexinV阳性细胞百分比（%，流式细胞术）
• Caspase-3活性：酶活单位（U/mg蛋白，参照GB/T39140）
• 线粒体膜电位：JC-1红绿比（比值变化≥1.5）

DNA损伤评估：

• 彗星尾长：尾长百分比（%DNAintail，参照ISO21427）
• γ-H2AX焦点：焦点数/细胞（荧光计数法）
• 8-OHdG含量：氧化损伤标记（ng/mL，HPLC检测）

基因表达谱：

• MT基因表达：相对倍数变化（Log2FC，qPCR法）
• HSP70水平：mRNA表达量（foldchange）
• 重金属转运蛋白：表达差异（如ZIP8基因）

蛋白质组学分析：

• 差异蛋白：数量（P<0.05显著性）
• 磷酸化位点：变化比率（质谱法）
• 蛋白质降解：泛素化水平（Westernblot定量）

代谢产物检测：

• ATP含量：相对水平（%，参照GB/T16886.5）
• 乳酸产量：浓度（mmol/L）
• 谷氨酸释放：神经递质变化（μM）

重金属累积测定：

• 细胞内浓度：重金属含量（μg/mg蛋白）
• 亚细胞分布：线粒体/细胞核比例
• 结合蛋白：金属硫蛋白结合率（%）

模型验证参数：

• 预测准确性：ROC曲线下面积（AUC≥0.7）
• 交叉验证：误差率（%）
• 剂量响应拟合：EC50值计算（非线性回归）

检测范围

1.肝细胞模型：涵盖HepG2细胞株，重点检测镉暴露引起的肝毒性、代谢紊乱及谷胱甘肽耗竭。

2.肾细胞模型：基于HK-2细胞系，侧重铅诱导的肾小管损伤、氧化应激标记及细胞凋亡率变化。

3.神经细胞模型：采用SH-SY5Y神经元，聚焦汞暴露导致的突触功能退化、凋亡率上升及基因表达异常。

4.免疫细胞模型：使用THP-1巨噬细胞，检测砷诱发的炎症因子释放、吞噬功能抑制及ROS爆发。

5.干细胞模型：涉及人间充质干细胞，评估重金属对分化潜能影响、存活率下降及DNA损伤累积。

6.3D细胞培养模型：球状体或多层培养，模拟组织层次毒性渗透、分布不均及代谢产物梯度变化。

7.原代细胞模型：提取大鼠肺泡巨噬细胞，侧重铬暴露的急性炎症响应、细胞因子风暴及膜完整性破坏。

8.共培养系统：肝-肾或神经-胶质细胞共培养，检测器官间毒性传递、协同效应及屏障功能损伤。

9.水生生物细胞模型：斑马鱼胚胎细胞，用于环境水体重金属风险评估、发育畸形及基因突变检测。

10.植物细胞模型：拟南芥原生质体，研究土壤污染物对植物细胞毒性、光合抑制及重金属累积机制。

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5体外细胞毒性测试
• ISO21427细胞遗传毒性彗星试验
• ASTME2523细胞活力标准测试方法

国家标准：

• GB/T16886.5医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验
• GB/T39140细胞凋亡检测方法
• GB/T5009食品安全重金属限量检测通则

方法差异说明：国际标准如ISO10993-5允许血清浓度范围10-20%，而GB/T16886.5限定为10%，确保检测一致性；ASTME2523规定细胞培养时间≤24小时，GB标准可扩展至48小时以适应慢性毒性模拟；在基因表达检测中，ISO方法推荐SYBRGreen探针，GB/T标准偏好TaqMan探针用于更高特异性。

检测设备

1.CO2培养箱：ThermoScientificHeracell150i（温度精度±0.1°C，CO2控制±0.1%）

2.倒置显微镜：OlympusIX83（分辨率0.17μm，物镜放大10×-100×）

3.酶标仪：BioTekSynergyH1（波长范围200-999nm，精度±1%）

4.流式细胞仪：BDFACSCantoII（检测通道8个，流速12μL/min）

5.实时荧光定量PCR仪：RocheLightCycler480（温度均一性±0.1°C，检测通道6个）

6.电感耦合等离子体质谱仪：PerkinElmerNexION300X（检测限0.1ppt，质量范围3-280amu）

7.荧光显微镜：LeicaDMi8（激发波长365-640nm，LED光源）

8.超速离心机：BeckmanCoulterOptimaXPN（最高转速100,000rpm，温度控制4-40°C）

9.细胞计数器：CountessIIFL（计数范围5×10^4-1×10^7cells/mL，荧光检测）

10.电泳系统：Bio-RadMini-PROTEANTetra（电压范围10-500V，凝胶尺寸8×10cm）

11.微孔板洗涤器：MolecularDevicesAquaMax2000（洗涤精度CV<2%，96/384孔兼容）

12.原子吸收光谱仪：ThermoFisheriCE3300（检出限0.01μg/L，火焰/石墨炉模式）

13.冷冻切片机：LeicaCM1950（切片厚度1-100μm，温度-35至-5°C）

14.生物安全柜：EscoAirstreamClassII（风速0.3-0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%）

15.细胞培养摇床：NewBrunswickInnova44（转速30-500rpm，温度范围4-50°C）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器 资质