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蛋白结合率测试研究

2025-09-03关键词:蛋白结合率测试研究,中析研究所,CMA/CNAS资质,北京中科光析科学技术研究所相关:
蛋白结合率测试研究

蛋白结合率测试研究摘要:蛋白结合率测试研究专注于精确量化生物活性分子与蛋白质之间的相互作用特性,核心检测对象包括药物-血浆蛋白结合率、抗体-抗原亲和力及受体-配体结合常数。关键项目涵盖平衡解离常数(Kd)、结合百分比、结合动力学参数(如kon和koff速率)、热力学参数(ΔG、ΔH、ΔS)、特异性结合评估及竞争性抑制实验。该研究采用高通量筛选技术和精密仪器,应用于药代动力学、毒理学及生物标志物发现,确保数据准确性和重现性以满足法规要求。

参考周期:常规试验7-15工作日,加急试验5个工作日。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

结合亲和力检测:

  • 平衡解离常数测定:Kd值(范围0.1nM-100μM,参照ISO10993-18)
  • 最大结合容量测定:Bmax值(单位nmol/mgprotein)
  • 结合百分比计算:游离分数与结合分数比值(精度≥95%)
动力学参数检测:
  • 结合速率常数测定:kon值(单位M⁻¹s⁻¹,参照ASTME2935)
  • 解离速率常数测定:koff值(单位s⁻¹)
  • 半衰期计算:t₁/₂(基于koff值)
热力学参数检测:
  • 吉布斯自由能变化测定:ΔG值(单位kJ/mol)
  • 焓变测定:ΔH值(单位kJ/mol)
  • 熵变测定:ΔS值(单位J/mol·K)
特异性结合测试:
  • 非特异性结合评估:NSB值(需≤总结合的10%)
  • 选择性结合指数:SI值(基于竞争性实验)
  • 交叉反应性测试:针对类似蛋白家族
竞争性结合测试:
  • 半数抑制浓度测定:IC50值(范围1nM-100μM)
  • Ki值计算:基于Cheng-Prusoff方程
  • displacement曲线拟合:使用Hill方程
pH依赖性测试:
  • pH-结合profile测定:pH范围5.0-9.0
  • 最适pH确定:基于最大结合活性
  • 缓冲液离子强度影响:钠离子浓度0-150mM
温度依赖性测试:
  • 温度-结合曲线测定:范围4-37°C
  • 阿伦尼乌斯图分析:活化能Ea计算
  • 热稳定性评估:Tm值测定
血清蛋白结合测试:
  • 人血清白蛋白结合率:重点位点I和II
  • α-1酸性糖蛋白结合:用于碱性药物
  • 脂蛋白结合评估:用于疏水性化合物
膜蛋白结合测试:
  • GPCR结合亲和力:针对特定受体亚型
  • 离子通道结合测定:使用放射性配体
  • 转运蛋白相互作用:Km和Vmax参数
高通量筛选检测:
  • 96/384孔板结合assay:Z'因子≥0.5
  • 自动化液体处理:移液精度±1%
  • 数据归一化处理:使用B/F比值

检测范围

1.人血清白蛋白(HSA):重点检测药物结合位点I和II,评估结合亲和力、displacement效应及pH依赖性,应用于药代动力学研究。

2.牛血清白蛋白(BSA):常用于初步筛选,检测疏水相互作用、荧光quenching及热稳定性,适用于低成本预实验。

3.重组蛋白:包括His-tag或GST-tag融合蛋白,重点检测标签对结合的影响、纯度验证及活性确认,用于生物制剂开发。

4.单克隆抗体:检测抗原结合affinity、表位mapping及Fcregion相互作用,应用于免疫治疗剂优化。

5.酶蛋白:如细胞色素P450,重点检测抑制剂结合、催化速率变化及代谢产物影响,用于药物-药物相互作用研究。

6.膜受体:包括GPCRs和离子通道,检测配体结合特异性、变构调节及信号传导关联,用于靶点验证。

7.肽类化合物:短肽或环肽,评估序列特异性结合、二级结构影响及蛋白酶稳定性,应用于肽类药物设计。

8.小分子药物:有机化合物库,检测血浆蛋白结合率、组织分配系数及渗透性,用于ADME特性评估。

9.核酸适配体:寡核苷酸序列,重点检测蛋白结合selectivity、结构稳定性及细胞内递送效率,用于诊断试剂开发。

10.细胞表面蛋白:如CDmarkers,检测抗体结合affinity、内化速率及免疫反应性,用于流式细胞术校准。

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-18:2020生物材料蛋白结合试验方法
  • ASTME2935-18动力学结合参数测定标准指南
  • ICHQ2(R1)分析方法验证指导原则
国家标准:
  • GB/T16886.18-2022医疗器械生物学评价蛋白结合试验
  • GB/T39201-2020药物蛋白结合率测定通用方法
  • GB/T33215-2016生物样品中蛋白结合分析技术规范
方法差异说明:ISO标准强调缓冲液组成和温度控制,而GB/T更注重样品前处理步骤;ASTM规范动力学数据拟合算法,与ICH在验证参数上存在接受标准差异,如精度要求ISO为±5%,GB/T为±10%。

检测设备

1.等温滴定calorimeter:MicroCalPEAQ-ITC型(温度范围2-80°C,灵敏度0.1μcal/s)

2.表面等离子共振仪:Biacore8K型(检测通道数8,流速范围1-100μL/min)

3.荧光光谱仪:HitachiF-7100型(波长范围200-900nm,带宽1nm)

4.紫外可见分光光度计:ShimadzuUV-2600型(波长范围190-1100nm,分辨率0.1nm)

5.超速离心机:BeckmanCoulterOptimaXPN-100型(最大转速100,000rpm,温度控制±0.1°C)

6.液相色谱-质谱联用仪:Agilent6495C型(质量范围50-2000m/z,精度±0.1Da)

7.微孔板阅读器:ThermoFisherVarioskanLUX型(检测模式荧光、发光、吸收,孔板格式96/384)

8.核磁共振仪:BrukerAvanceNEO600MHz型(场强14.1T,探头类型QCI-F)

9.自动化液体处理系统:HamiltonMicrolabSTARlet型(移液体积0.5-1000μL,精度±0.5%)

10.电泳设备:Bio-RadMini-PROTEANTetra型(电压范围10-300V,凝胶尺寸8x10cm)

11.放射性检测器:PerkinElmerTri-Carb4910TR型(计数效率≥70%,本底≤50CPM)

12.动态光散射仪:MalvernZetasizerNanoZS型(尺寸范围0.3nm-10μm,温度范围0-90°C)

13.圆二色谱仪:JascoJ-1500型(波长范围180-800nm,带宽0.1nm)

14.红外光谱仪:NicoletiS50型(波数范围4000-400cm⁻¹,分辨率0.25cm⁻¹)

15.显微镜成像系统:OlympusIX83型(magnificationupto100x,相机分辨率4MP)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

中析仪器资质

中析蛋白结合率测试研究-由于篇幅有限,仅展示部分项目,如需咨询详细检测项目,请咨询在线工程师

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