核酸药物纯度检测

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

化学纯度检测：

• 总核酸含量：A260nm吸光度值（参照USP-NF通则），纯度比A260/A280≥1.8
• 残留溶剂：乙腈≤0.1%、二甲亚砜≤0.5%（ICHQ3C标准）
• 无机离子残留：钠离子≤50ppm、氯离子≤30ppm

物理性质检测：

• 分子量分布：SEC-HPLC保留时间偏差±0.1min，多分散指数≤1.2
• 溶解度：在PBS缓冲液中浓度≥5mg/mL，无沉淀
• 热稳定性：熔解温度（Tm值）偏差±1°C

生物学活性检测：

• 酶活性抑制率：IC50值≤10nM（参照EP通则）
• 结合亲和力：KD值≤1nM，使用表面等离子共振技术
• 细胞转染效率：荧光表达率≥80%

杂质检测：

• DNA/RNA片段：凝胶电泳条带清晰度，主带占比≥95%
• 蛋白质杂质：BCAassay检测≤0.1μg/mg
• 宿主细胞DNA残留：qPCR检测≤1ng/mg

稳定性检测：

• 降解产物：HPLC峰面积≤2%总面积
• pH值：范围7.0-7.5，偏差±0.2
• 氧化修饰：8-oxo-dG含量≤0.1%

无菌检测：

• 微生物限度：需氧菌总数≤10CFU/g
• 内毒素：LALassay≤0.1EU/mg
• 无菌性：直接接种法无生长

结构确认检测：

• 序列验证：Sangersequencing错误率≤0.1%
• 二级结构：圆二色谱ellipticity值偏差±5%
• 修饰碱基定位：质谱碎片离子匹配度≥90%

含量测定：

• 绝对定量：qPCRCt值偏差±0.5cycle
• 相对纯度：A260/A230ratio≥2.0
• 标化浓度：UV法误差±5%

残留检测：

• 试剂残留：EDTA≤0.01%、酚red≤0.001%
• 颗粒物：显微镜计数≤1000particles/mL
• 重金属：铅≤5ppm、砷≤3ppm

包装完整性检测：

• 泄漏测试：压力衰减≤5%
• 密封强度：拉伸力≥15N
• 外观检查：无裂纹、无污染

检测范围

1.合成寡核苷酸：包括反义寡核苷酸和siRNA，检测重点为序列准确性、修饰碱基含量及残留合成试剂，确保杂交效率和稳定性。

2.质粒DNA：涵盖超螺旋和线性形态，侧重超螺旋比例≥90%、宿主蛋白质残留≤0.1%及内毒素控制，用于基因治疗载体。

3.mRNA药物：包括加帽和polyA尾巴修饰产品，检测加帽效率≥95%、polyA长度分布（50-200nt）及翻译活性，重点防止降解。

4.siRNA双链：针对基因沉默应用，检测双链完整性、off-target效应评估及递送系统兼容性，确保沉默效率≥70%。

5.反义寡核苷酸：含硫代磷酸酯修饰，检测修饰度≥99%、核酸酶抗性及体内半衰期，侧重毒理学杂质。

6.DNA疫苗：包括病毒载体和非病毒载体，检测载体完整性、表达效率及免疫原性，重点控制细菌DNA残留。

7.RNA疫苗：如COVID-19mRNA疫苗，检测脂质纳米颗粒包封率≥80%、RNA完整性及冷链稳定性，避免免疫副作用。

8.核酸适配体：用于靶向治疗，检测结合特异性（KD≤1nM）、亲和力稳定性及血清抗性，确保临床应用安全。

9.基因编辑工具：如CRISPRgRNA，检测编辑效率≥90%、脱靶率≤0.1%及RNA二级结构，支持精准医疗。

10.核酸类似物：包括肽核酸和锁核酸，检测杂交温度、酶稳定性及细胞穿透性，重点评估生物分布。

检测方法

国际标准：

• USP-NF通则〈〉核酸含量测定：紫外分光光度法，要求A260/A280ratio1.8-2.0
• ICHQ3C残留溶剂检测：气相色谱法，限值依据毒性分类
• EP2.6.14核酸纯度：HPLC法，使用C18柱，缓冲液为TEAA
• ISO10993-1生物相容性测试：包括内毒素和细胞毒性
• ASTME3130核酸稳定性：加速试验条件40°C/75%RH

国家标准：

• 中国药典2020年版通则〈〉核酸药物检测：HPLC方法差异在于流动相使用磷酸盐缓冲液
• GB/T34796核酸纯度：qPCR法，与国际标准差异在引物设计特异性
• GB/T37876微生物检测：膜过滤法，限值较国际更严格
• GB/T39100残留DNA检测：荧光法，灵敏度达0.001ng
• GB/T39205核酸结构：CD光谱法，参数设置差异

方法差异说明：国际标准如USP多用乙腈作为HPLC流动相，而国家标准GB/T偏好甲醇；qPCR检测中，国际标准强调TaqMan探针，国家标准常用SYBRGreen；在稳定性测试中，ASTM标准注重温度循环，而中国药典侧重长期实时条件。

检测设备

1.高效液相色谱仪：Agilent1260InfinityII（波长范围190-800nm，流速精度±0.1%）

2.紫外可见分光光度计：ShimadzuUV-1900i（带宽1nm，精度±0.001Abs）

3.质谱仪：ThermoScientificQExactive（质量精度<1ppm，分辨率140000）

4.凝胶电泳系统：Bio-RadChemiDocMP（检测限0.1ngDNA，紫外/荧光模式）

5.实时荧光定量PCR仪：AppliedBiosystems7500Fast（动态范围10^7，Ct值重复性±0.1）

6.圆二色谱仪：JascoJ-1500（波长范围185-800nm，温度控制±0.1°C）

7.表面等离子共振仪：Biacore8K（灵敏度0.1RU，流速范围1-100μL/min）

8.超离心机：BeckmanCoulterOptimaXPN-100（最大转速100000rpm，温度控制±1°C）

9.颗粒计数器：PSSAccuSizer780AD（粒径范围0.5-400μm，计数精度±5%）

10.气相色谱仪：PerkinElmerClarus680（检测限0.1ppm，柱温箱范围-10°Cto450°C）

11.微生物检测系统：MerckMilliflexRapid（检测时间≤24h，灵敏度1CFU）

12.内毒素检测仪：CharlesRiverEndosafeNexgen-Micro（范围0.001-50EU/mL，测试时间15min）

13.稳定性试验箱：MemmertICP800（温度范围-10°Cto100°C，湿度控制10-98%RH）

14.核酸提取仪：QiagenQiacube（通量1-12样本，回收率≥95%）

15.荧光显微镜：OlympusIX83（分辨率0.2μm，荧光通道4个）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器资质