脑脊液中miRNA表达谱测序测定验证

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

样本预处理：

• 细胞离心分离：转速≥3000rpm（参照ISO17025），离心时间5-10min
• 样本沉淀处理：沉淀量≥50μL，杂质去除率≥95%
• 缓冲液优化：pH值7.0-7.5，离子强度≤0.1M

• 总RNA浓度：≥10ng/μL（参照GB/T37871），OD260/280≥1.8
• miRNA富集效率：回收率≥90%，片段大小18-25nt
• 抑制剂移除：残留蛋白≤0.01μg/μL，抑制剂清除率≥99%

• 接头连接效率：连接成功率≥98%，适配子浓度≥10nM
• PCR扩增：循环数≤15，扩增偏差±5%
• 片段筛选：大小范围150-300bp，筛选精度≥99.5%

• 测序深度：≥20Mreadspersample（参照ISO20395），覆盖度≥90%
• 读长设置：单端读长≥50bp，双端读长≥150bp
• 错误率控制：碱基错误率≤0.1%，Q30分数≥80%

• 原始数据过滤：低质量read去除率≥95%，接头污染≤0.5%
• 序列比对率：参考基因组比对率≥85%，唯一映射率≥70%
• GC含量偏差：GC%范围40-60%，偏差±2%

• miRNA定量：表达量TPM值范围10-10000，检测灵敏度≤1CPM
• 差异表达分析：log2FC≥1或≤-1，p值≤0.05
• 变异系数评估：CV≤15%，重复性验证≥98%

• qPCR交叉验证：Ct值≤35，扩增效率90-110%
• 靶基因预测：预测准确率≥85%，结合位点≥1
• 通路富集分析：p值≤0.01，FDR≤0.05

• 聚类分析：样本聚类距离≤0.1，相似度≥90%
• 网络构建：节点连接度≥5，边权重≥0.7
• 预后相关性：HR值≥1.5，置信区间95%

• 冻融循环耐受：循环次数≥3，表达变化≤10%
• 长期储存评估：-80°C储存≥6月，降解率≤5%
• 批次间差异：RSD≤8%，偏移校正因子±5%

• 特异性检测：非目标miRNA交叉反应率≤0.1%
• 灵敏度阈值：最低检测限≤0.1fmol，动态范围10^6
• 干扰因素测试：抑制剂影响≤5%，基质效应CV≤10%

检测范围

1.脑脊液样本：涵盖神经疾病患者及健康对照组，重点检测miRNA表达稳定性和疾病相关差异表达谱

2.血清样本：用于比较分析，侧重miRNA浓度变化及血液-脑脊液屏障穿透效应验证

3.血浆样本：检测循环miRNA特征，关注抗凝剂干扰及表达一致性评估

4.尿液样本：分析非侵入性来源，重点检测降解产物影响及低丰度miRNA捕获效率

5.细胞培养上清液：源自神经细胞模型，侧重体外条件下miRNA分泌动态及刺激响应验证

6.组织裂解液：如脑组织提取物，检测复杂基质背景下miRNA分离纯化及背景噪声控制

7.外泌体富集样本：分离囊泡相关miRNA，重点检测粒径分布≥50nm及标志蛋白阳性率≥95%

8.冻存生物库样本：长期保存标本，评估冻融循环耐受性及RNA完整性指数RIN≥7.0

9.疾病特异样本：如阿尔茨海默症患者标本，侧重病理阶段相关miRNA图谱及诊断阈值确立

10.合成miRNA对照：人工合成序列，用于方法灵敏度和特异性校准及阳性对照验证

检测方法

国际标准：

• ISO20395:2019Biotechnology-Requirementsforevaluatingtheperformanceofquantificationmethodsfornucleicacidtargetsequences
• ISO17025:2017Generalrequirementsforthecompetenceoftestingandcalibrationlaboratories
• EN15604:2018Molecularinvitrodiagnosticexaminations-Specificationsforpre-examinationprocessesforfrozentissue

• GB/T37871-2019高通量基因测序样本预处理规范
• GB/T30987-2014生物样本中核酸提取与纯化方法
• GB/T35538-2017微小RNA测序数据分析通用要求

检测设备

1.台式高速离心机：Eppendorf5427R型（最高转速25000rpm，温度控制范围-20°C至40°C）

2.分光光度计：ThermoNanoDropOne型（波长范围200-850nm，灵敏度0.1ng/μL）

3.自动化核酸提取仪：QiagenQiacube型（通量1-12样本/批次，提取效率≥95%）

4.高通量测序仪：IlluminaNovaSeq6000型（通量20Breads/run，读长2x150bp）

5.PCR扩增系统：Bio-RadCFX96型（温度精度±0.1°C，多通道检测≥96孔）

6.实时荧光定量PCR仪：RocheLightCycler480型（动态范围10^7，检测限≤0.1copies）

7.生物分析仪：Agilent2100型（片段分析精度±1bp，芯片通量12样本/次）

8.超低温冰箱：HaierDW-86L628型（温度范围-86°C，温度波动±1°C）

9.凝胶电泳系统：Bio-RadPowerPac型（电压范围10-300V，电流精度±0.1A）

10.微量振荡器：IKAMS3型（转速50-3000rpm，计时精度±1s）

11.真空浓缩仪：EppendorfConcentratorPlus型（蒸发效率≥50μL/min，温度控制30-80°C）

12.恒温混匀仪：BenchmarkScientificMultiTherm型（温度范围4-100°C，振荡频率0-1500rpm）

13.生物安全柜：EscoAC2-4S1型（洁净度Class100，风速0.3-0.5m/s）

14.数据服务器：DellPowerEdgeR750型（存储容量≥100TB，处理速度≥3GHz）

15.冷冻干燥机：LabconcoFreeZone型（真空度≤100mTorr，温度范围-50°C至40°C）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器 资质