分子病理学靶点定位测定

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

基因靶点定位检测：

• 荧光原位杂交（FISH）：靶点基因拷贝数（信号数/细胞，参照ASTME2363-19）、融合基因断裂位点定位（双色探针重叠率≥80%）
• 原位聚合酶链反应（insituPCR）：目标基因片段扩增产物定位（细胞内信号分布）、突变位点空间定位（突变型探针杂交信号强度）

• 免疫组织化学（IHC）：目标蛋白表达定位（细胞定位：胞核/胞质/胞膜）、表达强度评分（H-score：0-300，参照ASCO/CAP指南）
• 免疫荧光（IF）：蛋白共定位分析（两种靶点荧光信号重叠系数≥0.7）、磷酸化蛋白激活状态定位（磷酸化位点特异性抗体染色）

• 实时荧光定量PCR（qPCR）：靶基因mRNA表达量（Ct值≤35，相对定量：2^-ΔΔCt）、microRNA表达水平（ΔCt值差异≥2倍）
• 数字PCR（dPCR）：突变等位基因频率（MAF，≥0.1%）、循环游离DNA（cfDNA）靶点浓度（copies/μL）

• Sanger测序：单核苷酸变异（SNV）位点（如EGFRexon19缺失、ALKL1196M）、插入/缺失突变（indel）长度（±1bp）
• 下一代测序（NGS）：高频突变位点覆盖度（≥1000×）、突变丰度（≥1%）

• RNA-seq：融合基因转录本序列（覆盖融合断点≥50bp）、融合基因表达量（TPM≥1）
• 反转录PCR（RT-PCR）：融合基因产物长度（±2bp）、融合类型（顺式/反式融合）

• 阵列比较基因组杂交（array-CGH）：基因拷贝数变异（CNV）片段大小（≥50kb）、拷贝数变化倍数（≥2倍或≤0.5倍）
• 多重连接依赖探针扩增（MLPA）：靶基因拷贝数（±1copy）、拷贝数变异区域定位（染色体臂水平）

• 亚硫酸氢盐测序：CpG岛甲基化率（≥5%）、甲基化位点分布（启动子区域）
• 甲基化特异性PCR（MSP）：甲基化等位基因比例（≥10%）

• 双荧光素酶报告基因assay：靶基因3'UTR结合位点验证（荧光活性降低≥50%）、microRNA-mRNA相互作用强度（相对荧光值比值）
• RNA免疫沉淀（RIP）：结合靶mRNA的microRNA富集倍数（≥2倍）

• CTC表面标志物定位：EpCAM（细胞膜定位）、CK19（胞质定位）
• CTC内靶点基因检测：EGFR突变（exon19缺失）、HER2扩增（拷贝数≥6）
• CTC计数与靶点共定位：CTC数量（≥1个/7.5mL血液）、靶点表达阳性率（≥20%）

• 外泌体表面蛋白靶点：PD-L1（表达量，流式细胞术MFI值）、CD63（阳性率≥80%）
• 外泌体内核酸靶点：circRNA表达量（qPCRCt值≤38）、突变型DNA片段（数字PCRMAF≥0.01%）

• RNA原位杂交（RNA-ISH）：融合基因转录本空间定位（细胞内颗粒状信号）、表达水平评分（信号密度：1-4级）
• 单细胞RNA-seq：单个细胞内融合基因转录本（UMI计数≥5）、融合断点序列（覆盖≥10个reads）

检测范围

1.肿瘤组织标本：涵盖肺癌、乳腺癌、结肠癌等常见恶性肿瘤手术/活检组织，重点检测驱动基因突变（如EGFR、ALK）及蛋白靶点（如PD-L1）的空间定位与表达水平

2.细胞系标本：肿瘤细胞系（如A549、MCF-7）及正常对照细胞系，侧重靶点基因拷贝数变异（CNV）及融合基因（如EML4-ALK）的鉴定

3.血液标本：外周血、骨髓血等，重点检测循环游离DNA（cfDNA）中的突变位点（如KRASG12C）及循环肿瘤细胞（CTC）表面标志物（如EpCAM）

4.体液标本：胸腔积液、腹水、脑脊液等，侧重外泌体靶点（如miR-21）及脱落细胞内蛋白靶点（如CA125）的定位与定量

5.穿刺标本：肝穿刺、肾穿刺等小组织标本，重点检测癌基因（如MYC）扩增及抑癌基因（如p53）突变的空间分布

6.石蜡包埋标本（FFPE）：archival组织标本，侧重靶点基因甲基化状态（如MGMT启动子甲基化）及蛋白表达（如HER2）的回顾性分析

7.新鲜冰冻标本：手术新鲜组织冰冻切片，重点检测融合基因（如ROS1）的原位杂交信号及蛋白靶点（如VEGF）的免疫荧光定位

8.尿液标本：尿液沉渣及尿液外泌体，侧重膀胱癌相关靶点（如FGFR3突变）及microRNA（如miR-155）的检测

9.唾液标本：唾液外泌体及脱落细胞，重点检测口腔癌相关靶点（如HPVE6/E7mRNA）及基因拷贝数变异（如CCND1扩增）

10.脑脊液标本：神经肿瘤患者脑脊液，侧重循环肿瘤细胞（CTC）靶点（如GFAP）及融合基因（如NTRK1）的检测

检测方法

国际标准：

• ISO15189:2022医学实验室质量和能力要求（涵盖分子病理学检测的质量管理，包括方法验证、结果报告等环节）
• ASTME2363-19荧光原位杂交（FISH）检测基因拷贝数变异的标准指南（规定了FISH检测的样本处理、探针设计及信号判读标准）
• CLSIC24-A4临床分子生物学检测的质量保证（提供了PCR、测序等分子检测方法的验证流程及室内质控要求）

• GB/T35029-2018分子病理诊断技术规范（明确了基因检测、免疫组化等方法的操作步骤及结果判读标准）
• GB/T21767-2008临床实验室定量测定室内质量控制指南（适用于核酸定量检测的室内质控规则，如1-3s规则）
• WS/T766-2020新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南（参考了分子检测的样本处理、核酸提取及PCR扩增流程）

检测设备

1.荧光原位杂交仪：雅培VysisPathVysion（检测通道：4色荧光，分辨率：≤100kb）

2.免疫组化染色仪：罗氏BenchMarkJianCeTRA（染色速度：60分钟/批，抗体加载精度：±1μL）

3.实时荧光定量PCR仪：AppliedBiosystemsQuantStudio7Flex（检测通道：6色，灵敏度：1copy/μL）

4.下一代测序仪：IlluminaNovaSeq6000（读长：150bppaired-end，通量：1.2Tb/run）

5.数字PCR仪：Bio-RadQX200（检测通道：2色，分辨率：0.01%突变丰度）

6.激光扫描共聚焦显微镜：蔡司LSM900（物镜：63×油镜，分辨率：≤200nm）

7.流式细胞仪：BDFACSAriaIII（检测参数：18色荧光，分选纯度：≥98%）

8.亚硫酸氢盐测序仪：ThermoFisherIonS5XL（读长：400bp，覆盖度：≥100×）

9.多重连接依赖探针扩增仪：MRC-HollandSALSAMLPA（检测位点：≤45个/反应，灵敏度：±1copy）

10.外泌体分离系统：ThermoFisherTotalExosomeIsolation（回收率：≥80%，纯度：CD63阳性率≥90%）

11.循环肿瘤细胞捕获仪：CellSearchSystem（捕获效率：≥80%，检测限：1个CTC/7.5mL血液）

12.甲基化特异性PCR仪：Bio-RadCFX96（检测通道：4色，重复性：CV≤5%）

13.RNA-seq文库制备系统：IlluminaNexteraXT（文库片段大小：300-500bp，产量：≥10ng/μL）

14.免疫荧光染色仪：LeicaBondMax（染色周期：30-90分钟，抗体交叉污染率：≤0.1%）

15.微阵列芯片扫描仪：AgilentSureScan（分辨率：2μm，动态范围：0-65535）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器 资质