药品过敏反应血管通透性试验

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

血管通透性量化检测：

• 伊文思蓝渗出量：μg/g组织（参照ISO10993-10）
• 荧光素钠渗漏率：%（体外模型，参照ASTME1986）
• 跨内皮电阻（TER）：Ω·cm²（细胞模型，参照YY/T1581）

• 组胺：pmol/mL（流式细胞术，参照GB/T34796）
• 白三烯C4（LTC4）：pg/mL（ELISA，参照OECD406）
• 前列腺素D2（PGD2）：ng/mL（化学发光法，参照ASTME1958）

• 内皮一氧化氮合酶（eNOS）活性：U/mg蛋白（比色法）
• 血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）表达量：荧光强度单位（免疫荧光法）
• 内皮细胞凋亡率：%（AnnexinV/PI双染，参照GB/T14926.61）

• 血管周围炎症细胞浸润：评分0-4级（参照WHO标准）
• 内皮细胞肿胀程度：胞质空泡化率%（HE染色）
• 基底膜完整性：电镜下断裂面积比%（透射电镜法）

• 主动全身过敏反应（ASA）：评分0-5级（参照FDAGuidance）
• 被动皮肤过敏反应（PCA）：蓝斑直径mm（参照OECD406）
• 迟发型超敏反应（DTH）：足垫增厚率%（参照GB/T16886.10）

• Transwell内皮细胞单层通透性：荧光素钠透过率%/h（参照ASTME1986）
• 内皮细胞间隙宽度：nm（原子力显微镜测定）
• 细胞外基质（ECM）降解率：MMP-2/MMP-9活性（明胶酶谱法，参照GB/T20186）

• IL-4：pg/mL（流式细胞术，参照BDBiosciencesProtocol）
• IL-13：pg/mL（ELISA，参照R&DSystemsKit）
• TNF-α：pg/mL（化学发光法，参照雅培i2000）

• 紧密连接蛋白（Claudin-5）：Westernblot灰度值（参照GB/T21976）
• 黏附连接蛋白（VE-cadherin）：免疫荧光强度（激光共聚焦法）
• 基底膜蛋白（laminin）：免疫组化评分0-3级（参照GB/T19838）

• 类胰蛋白酶：ng/mL（参照CLIA876.1200）
• 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）：μg/L（荧光酶免疫法）
• 血小板激活因子（PAF）：pmol/L（液相色谱-质谱联用法）

• 内皮细胞迁移率：划痕愈合率%/24h（划痕试验）
• 管腔形成能力：分支点数/视野（Matrigel法，参照BDBiosciences）
• 增殖指数：Ki67阳性率%（免疫组化法）

检测范围

1.化学药物：涵盖小分子化学合成药（如抗生素、解热镇痛药、抗癫痫药），重点检测药物代谢产物（如青霉素降解物）对血管通透性的浓度依赖性影响

2.生物制品：包括重组蛋白药物（如胰岛素、生长激素）、单克隆抗体（如TNF-α抑制剂、HER2单抗），侧重糖基化修饰（如N-糖链）对内皮细胞完整性的长期作用

3.中药提取物：涉及植物药有效成分（如生物碱、黄酮类、皂苷类）及复方制剂（如感冒清热颗粒、逍遥丸），重点评估多成分协同作用对皮肤/黏膜血管的影响

4.疫苗制品：包括灭活疫苗（如新冠灭活疫苗）、减毒活疫苗（如麻疹疫苗）、subunit疫苗（如HPV疫苗），侧重佐剂（如铝hydroxide）诱导的急性血管通透性改变

5.局部用药物：如外用软膏（如糖皮质激素软膏、抗生素软膏）、滴眼剂（如左氧氟沙星滴眼液）、滴鼻剂（如麻黄碱滴鼻液），重点检测黏膜吸收后对眼周/鼻黏膜血管的短期刺激

6.细胞治疗产品：包括CAR-T细胞、干细胞制剂（如间充质干细胞）、树突状细胞疫苗，侧重细胞分泌因子（如IL-6、TNF-α）对宿主血管内皮的长期损伤

7.基因治疗药物：如腺病毒载体（Ad5）、腺相关病毒（AAV）、siRNA药物，重点评估载体材料（如脂质体）对血管屏障的急性破坏（如静脉注射后1h内通透性变化）

8.辅料及添加剂：如防腐剂（如山梨酸钾、苯扎溴铵）、增溶剂（如聚山梨酯80、吐温20）、矫味剂（如阿斯巴甜），重点检测辅料浓度（如0.1%-1%）依赖性血管通透性改变

9.化妆品原料：如美白成分（如氢醌、维生素C衍生物）、防晒剂（如二氧化钛、氧化锌）、染发剂（如对苯二胺），侧重经皮吸收后对真皮毛细血管的慢性损伤（如长期使用后血管扩张）

10.农药及兽药：如杀虫剂（如拟除虫菊酯、有机磷农药）、兽用抗生素（如青霉素类、头孢菌素类），重点检测动物体内药物残留（如牛奶、肉类中青霉素残留）对血管的慢性毒性

检测方法

国际标准：

• OECD406:2011皮肤致敏性试验（被动皮肤过敏反应法）：规定了体内PCA试验的动物选择（guineapig）、抗原剂量（0.1-1mg/只）、蓝斑测量方法（直径mm，精度±0.1mm）
• ISO10993-10:2010医疗器械生物学评价第10部分：刺激与致敏试验：涵盖伊文思蓝渗出法的组织处理（液氮研磨1min）、荧光分光光度计测定（激发波长620nm，发射波长680nm，狭缝宽度5nm）
• ASTME1986:2021体外内皮细胞通透性测定标准方法：规定了Transwell模型的细胞接种密度（1×10^5cells/well，孔径0.4μm）、荧光素钠浓度（100μg/mL）、孵育时间（2h，37℃，5%CO2）
• ASTME1958:2017组胺测定标准方法（高效液相色谱法）：规定了血浆样品前处理（固相萃取法）、色谱柱（C18，5μm，250×4.6mm）、流动相（甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾=30:70，pH3.0）

• GB/T16886.10-2017医疗器械生物学评价第10部分：刺激与致敏试验：等效采用ISO10993-10:2010，但增加了对国产实验动物（如SPF级昆明小鼠）的微生物学指标要求（如沙门氏菌阴性）
• GB/T34796-2017动物源性食品中组胺的测定高效液相色谱法：适用于体内试验中血浆/组织组胺的测定，与ASTME1958相比，流动相调整为乙腈-0.1%磷酸（40:60），检测波长254nm（提高对组胺的响应值）
• YY/T1581-2018药物过敏反应体外试验内皮细胞通透性测定：规定了体外模型的内皮细胞株（如人脐静脉内皮细胞HUVEC）、培养条件（37℃，5%CO2，10%FBS）、TER测定仪（如EVOM2，电极间距1mm）的使用方法（每日测定1次，连续7天）
• GB/T14926.61-2001实验动物细胞凋亡检测方法：规定了AnnexinV/PI双染法的试剂浓度（AnnexinV-FITC1μg/mL，PI5μg/mL）、孵育时间（15min，避光）、流式细胞仪参数（激发波长488nm，发射波长530nm（FITC）、610nm（PI））

检测设备

1.荧光分光光度计：HitachiF-7000（激发波长范围200-700nm，发射波长范围250-800nm，检测限0.1μg/mL，straylight<0.001%）

2.酶标仪：Bio-RadModel680（波长范围400-750nm，吸光度范围0-4.0A，精度±1%，重复性±0.5%）

3.原子力显微镜：BrukerDimensionIcon（扫描范围150μm×150μm，分辨率0.1nm（垂直）/0.2nm（水平），最大扫描速度10Hz）

4.流式细胞仪：BDFACSCantoII（检测通道6色，分选速度10000cells/s，灵敏度<100MESF（FITC），数据存储格式FCS3.0）

5.实时定量PCR仪：AppliedBiosystemsStepOnePlus（反应体积10-100μL，检测波长523nm（FAM）、553nm（VIC）、580nm（NED），扩增效率90%-110%，重复性±0.5Ct）

6.跨内皮电阻仪：WorldPrecisionInstrumentsEVOM2（电阻范围0-2000Ω·cm²，精度±5%，电极类型STX2（适合Transwell小室），温度补偿0-40℃）

7.冷冻切片机：LeicaCM1950（切片厚度1-100μm，温度范围-50℃至+20℃，振动频率50-100Hz，刀片类型一次性钢刀（厚度0.2mm））

8.荧光显微镜：OlympusIX73（物镜倍数4×-100×（油镜），荧光滤光片组（FITC：激发460-490nm，发射510-550nm；TRITC：激发530-560nm，发射590-650nm；DAPI：激发350-380nm，发射430-470nm），分辨率0.2μm（100×油镜））

9.高效液相色谱仪：Agilent1260InfinityII（泵类型二元高压梯度（最大压力1200bar），检测器DAD（波长范围190-900nm，分辨率1nm），柱温箱范围10-80℃（精度±0.1℃），自动进样器进样体积0.1-100μL（精度±0.5%））

10.动物活体成像系统：PerkinElmerIVISSpectrum（激发波长范围400-850nm（10nm步长），发射波长范围420-870nm（10nm步长），灵敏度<1pg荧光素酶（小鼠体内），视野范围5-25cm）

11.细胞培养箱：ThermoScientificForma3111（CO2浓度范围0-20%（精度±0.1%），温度范围25-45℃（精度±0.1℃），湿度>95%（通过蒸汽发生器维持），内胆材质316L不锈钢（耐腐蚀））

12.电子天平：MettlerToledoXS205（最大称量220g，可读性0.01mg，重复性±0.02mg，线性误差±0.03mg）

13.高速离心机：Eppendorf5810R（最大转速15000rpm（离心力25000×g），温度范围-10℃至+40℃（精度±1℃），转子类型（角转子：F-34-6-38，容量6×38mL；水平转子：A-4-81，容量8×100mL））

14.凝胶成像系统：SyngeneG:BoxF3（相机类型5MPCMOS（分辨率2592×1944），光源类型（UV：302nm，功率8W；可见光：蓝473nm、绿532nm、红635nm，功率各5W），动态范围16-bit（65536级灰度））

15.超声波细胞破碎仪：SonicsVCX130（功率范围10-130W（连续可调），频率20kHz（±100Hz），脉冲模式（0.1-9.9son/off），探头类型（1/8英寸：适合1-5mL；1/4英寸：适合5-50mL；1/2英寸：适合50-500mL））

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器 资质