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心脏灌流缺血再灌注测试

2025-07-30 关键词:心脏灌流缺血再灌注测试测试仪器,心脏灌流缺血再灌注测试测试案例,心脏灌流缺血再灌注测试测试范围 相关:
心脏灌流缺血再灌注测试

心脏灌流缺血再灌注测试摘要:心脏灌流缺血再灌注测试是一种评估心肌组织在血流中断(缺血)和恢复(再灌注)过程中损伤与恢复能力的实验方法。核心检测对象包括离体心脏模型、心肌细胞培养物和动物整heart标本。关键项目涉及细胞活力、酶活性、功能参数和氧化应激指标,如细胞死亡率、乳酸脱氢酶释放量、心功能恢复率和活性氧水平等,通过量化损伤程度评估潜在干预措施的疗效。

参考周期:常规试验7-15工作日,加急试验5个工作日。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

细胞活力检测:

  • 细胞死亡率:缺血后再灌注死亡率(≤15%),参照ISO10993-5
  • 增殖能力:细胞增殖率(≥80%对照值)
  • 凋亡指数:TUNEL阳性细胞比例(控制在5%以内)
酶活性分析:
  • 乳酸脱氢酶释放量:LDH释放值(≤200U/L)
  • 肌酸激酶活性:CK活性变化(±10%基线值)
  • 超氧化物歧化酶活性:SOD活性(≥150U/mg蛋白)
功能恢复评估:
  • 心功能恢复率:射血分数恢复值(≥70%初始值)
  • 收缩力参数:最大收缩力下降幅度(控制在20%以内)
  • 电生理稳定性:心律失常发生率(≤5次/小时)
氧化应激指标测定:
  • 活性氧水平:ROS生成量(≤2-fold增加)
  • 脂质过氧化产物:MDA浓度(≤1.5nmol/mg蛋白)
  • 抗氧化酶活性:CAT活性(≥100U/mg蛋白)
膜完整性测试:
  • 膜电位变化:荧光染料渗透率(控制在10%以内)
  • 离子通道功能:钙离子内流速率(±5%对照值)
  • 细胞通透性:台盼蓝排除率(≥95%)
炎症因子检测:
  • TNF-α浓度:ELISA测定值(≤20pg/mL)
  • IL-6水平:炎症因子变化(±15%基线)
  • 中性粒细胞浸润:MPO活性(≤0.5U/g组织)
代谢参数监测:
  • ATP含量:ATP水平(≥80%初始值)
  • 乳酸堆积量:乳酸浓度(≤5mmol/L)
  • 葡萄糖摄取率:同位素标记变化(±10%对照)
基因表达分析:
  • 应激基因上调:HSP70表达(fold-change≤2)
  • 凋亡相关基因:Bax/Bcl-2比率(控制在1.0以内)
  • 修复基因表达:VEGFmRNA水平(≥1.5倍增加)
结构完整性检查:
  • 线粒体肿胀:电子显微镜评分(等级≤2)
  • 肌纤维断裂率:组织切片分析(≤10%)
  • 血管通透性:伊文思蓝渗出量(≤50μg/g组织)
恢复能力验证:
  • 缺血耐受阈值:最大缺血时间(≤30分钟)
  • 再灌注损伤指数:综合评分(分值≤5)
  • 长期存活率:培养细胞存活(≥90%24小时)

检测范围

1.离体大鼠心脏灌流模型:Langendorff装置制备标本,检测重点为心功能恢复参数和酶释放量。

2.人心肌细胞培养物:原代或永生化细胞系,检测重点细胞死亡率与氧化应激指标。

3.小鼠整heart缺血模型:活体冠状动脉结扎标本,检测重点电生理稳定性和炎症因子。

4.猪心脏切片标本:大型动物组织样本,检测重点结构完整性与代谢参数。

5.转基因动物模型:基因敲除或过表达标本,检测重点基因表达与功能恢复。

6.缺血预处理组织:短暂缺血适应标本,检测重点耐受阈值与损伤指数。

7.药物干预心脏样本:添加治疗剂标本,检测重点酶活性变化与细胞活力。

8.不同缺血时间变体:缺血时长梯度样本,检测重点恢复率与膜完整性。

9.再灌注损伤优化模型:控制再灌注条件标本,检测重点ROS水平与炎症响应。

10.临床切除心肌组织:手术来源样本,检测重点ATP含量与基因表达。

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-5体外细胞毒性试验方法
  • ASTMF2900心脏组织功能评估指南
  • OECDTG432离体心脏灌流测试规范
国家标准:
  • GB/T16886.5医疗器械生物学评价细胞毒性方法
  • GB/T28021心肌损伤生物标志物检测规程
  • GB/T39758心血管模型氧化应激测定标准
方法差异说明:ISO标准侧重细胞存活率评估,而GB标准更注重酶活性定量;ASTM方法强调功能参数实时监测,GB标准定义更严格的控制组设计;OECD规范适用于动物模型,GB标准整合临床样本验证流程。

检测设备

1.离体心脏灌流系统:ADIPowerLab系统(恒流范围0-20mL/min,温度控制±0.1°C)

2.荧光显微镜:OlympusIX83型(分辨率0.2μm,荧光通道≥4个)

3.酶标仪:BioTekSynergyH1(波长范围200-999nm,检测精度±1%)

4.离心机:Eppendorf5425型(转速18000rpm,温度控制±0.5°C)

5.实时PCR仪器:RocheLightCycler480(检测通道6个,灵敏度0.01copies)

6.电生理记录仪:ADIChart系统(采样率10kHz,噪声抑制≤1μV)

7.高效液相色谱仪:Agilent1260型(流速范围0.001-10mL/min,检测限0.1ng)

8.超低温冰箱:ThermoScientificForma系列(温度-86°C,容量800L)

9.细胞培养箱:ThermoHeracell150i(CO2控制±0.1%,湿度95%)

10.组织切片机:LeicaRM2235型(切片厚度1-100μm,精度±0.5μm)

11.氧气监测仪:YSIPro20型(测量范围0-20mg/L,精度±0.1mg/L)

12.光谱分析仪:PerkinElmerLambda950(波长范围175-3300nm,分辨率0.05nm)

13.微电极放大器:AxonAxopatch200B(增益范围100-5000,带宽10kHz)

14.低温恒温槽:JulaboF25型(温度范围-40-200°C,稳定性±0.01°C)

15.多功能检测平台:MolecularDevicesSpectraMax(检测模式≥6种,通量384孔板)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

中析仪器 资质

中析心脏灌流缺血再灌注测试 - 由于篇幅有限,仅展示部分项目,如需咨询详细检测项目,请咨询在线工程师

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