400-6350567

谷胱甘肽还原酶活性试验

2025-07-28 关键词:谷胱甘肽还原酶活性试验测试仪器,谷胱甘肽还原酶活性试验测试范围,谷胱甘肽还原酶活性试验测试方法 相关:
谷胱甘肽还原酶活性试验

谷胱甘肽还原酶活性试验摘要:谷胱甘肽还原酶活性试验是一种测定谷胱甘肽还原酶(GR)酶活性的生化检测方法,核心检测对象为GR催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原为还原型谷胱甘肽(GSH)的效率,关键项目包括酶活性单位(基于NADPH消耗速率)、动力学参数(如Km和Vmax值)、温度及pH依赖性(优化范围为25-37℃,pH 7.0-7.6),以及抑制剂效应评估(如BCNU影响)。该方法广泛应用于氧化应激监测、药物毒理学研究及生物样本质量评价,需确保反应特异性(如空白对照排除干扰)和线性范围验证(标准曲线R²≥0.99)。

参考周期:常规试验7-15工作日,加急试验5个工作日。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

酶活性测定:

  • 基础活性:NADPH消耗速率(单位:U/mg蛋白,参照ISO10993-10)、反应线性范围(R²≥0.98)
  • 特异性验证:空白对照吸光度偏差(≤0.005OD)
动力学参数分析:
  • 米氏常数:Km值(针对GSSG底物,范围0.05-0.2mM)
  • 最大反应速率:Vmax值(单位:μmol/min/mg)
温度依赖性测试:
  • 最适温度:活性峰值温度(25-37℃)
  • 热稳定性:半衰期(t1/2≥30minat40℃)
pH依赖性评估:
  • 最适pH:峰值pH值(7.0-7.6)
  • 缓冲液兼容性:活性保留率(≥95%inPBS)
抑制剂筛选:
  • 抑制效应:IC50值(针对BCNU等抑制剂)
  • 选择性测试:交叉反应性(≤5%)
稳定性测试:
  • 冻融稳定性:活性损失率(≤10%after3cycles)
  • 长期储存:-80℃保存活性(≥90%after6months)
纯度分析:
  • 杂质检测:非特异性酶活性(≤2%)
  • 蛋白浓度:Bradford法测定(偏差±5%)
生物样本适用性:
  • 回收率测试:加标回收率(95-105%)
  • 基质效应:活性抑制率(≤10%)
标准曲线验证:
  • 线性度:相关系数(R²≥0.99)
  • 检测限:LOD值(≤0.01U/mL)
质量控制:
  • 批内精密度:RSD≤5%
  • 批间精密度:RSD≤8%

检测范围

1.人体血液样本:血清或血浆中GR活性测定,重点监测氧化应激生物标志物变化及疾病关联性

2.动物组织裂解液:肝、肾等器官样本,侧重酶活性分布及毒理学影响评估

3.细胞培养物:细胞裂解液(如HepG2细胞),关注药物处理后的酶活性响应

4.植物提取物:叶片或根茎样本,重点分析抗氧化能力与环境胁迫关联

5.微生物培养液:细菌或酵母发酵液,检测GR活性在代谢工程中的应用

6.临床诊断样本:尿液或唾液,用于非侵入式氧化状态监测

7.生物药剂:重组蛋白制剂,验证生产过程中酶活性的稳定性

8.食品添加剂:抗氧化剂样品,评估其对GR活性的调控效应

9.环境污染物样本:水体或土壤提取物,重点检测重金属对酶活性的抑制

10.药物代谢产物:体外代谢反应液,分析药物-酶相互作用动力学

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-10:2021医疗器械生物学评价-酶活性测定
  • ASTME2523-13生化酶动力学测试方法
国家标准:
  • GB/T16886.10-2017医疗器械生物学评价第10部分:刺激与致敏试验
  • GB/T5009.170-2022食品中抗氧化酶活性测定
(方法差异:国际标准采用高灵敏度分光法,要求检测波长340nm;国家标准侧重样本前处理,规定缓冲液pH7.4)

检测设备

1.紫外可见分光光度计:ShimadzuUV-1800(波长范围190-1100nm,分辨率0.1nm)

2.恒温水浴槽:JulaboF32(控温精度±0.1℃,范围0-100℃)

3.高速离心机:Eppendorf5425R(最大转速15000rpm,温度控制4-40℃)

4.微量移液器:BrandTransferpette(量程0.1-1000μL,精度±0.5%)

5.酶标仪:BioTekSynergyH1(检测模式:荧光/吸光度,波长范围200-999nm)

6.恒温振荡器:IKAKS4000(转速50-400rpm,温度一致性±0.5℃)

7.冷冻离心机:ThermoScientificSorvallLYNX6000(温度范围-20℃至40℃,最大容量6x1000mL)

8.pH计:MettlerToledoSevenExcellence(测量范围0-14,精度±0.01)

9.超低温冰箱:HaierDW-86L388(温度范围-86℃,均匀性±3℃)

10.涡旋混合器:IKAMS3(转速100-3000rpm,定时功能0-60min)

11.蛋白浓度测定仪:NanoDropOne(检测限0.002mg/mL,波长280nm)

12.恒温培养箱:MemmertIN110(温度范围5-70℃,稳定性±0.3℃)

13.电子天平:SartoriusCPA225D(量程0.001g-220g,精度0.1mg)

14.样品研磨器:RetschMM400(频率30Hz,研磨时间1-15min)

15.真空浓缩仪:EppendorfConcentratorPlus(温度范围30-70℃,真空度<50mbar)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

中析仪器 资质

中析谷胱甘肽还原酶活性试验 - 由于篇幅有限,仅展示部分项目,如需咨询详细检测项目,请咨询在线工程师

相关检测

联系我们

热门检测

荣誉资质

  • cma
  • cnas-1
  • cnas-2