低温保存下心肌活力恢复试验

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

心肌细胞活力检测：

• 细胞存活率：采用CCK-8法检测，OD值≥0.8（参照ISO10993-5）
• 乳酸脱氢酶（LDH）漏出率：≤15%（参照ASTMF2149）
• 线粒体膜电位（Δψm）：JC-1荧光强度比≥1.5（参照GB/T16886.5）

• 三磷酸腺苷（ATP）含量：≥2.0μmol/g（参照ISO10993-12）
• 腺苷酸激酶（AK）活性：≤1.0U/mg（参照ASTMF1984）
• 乳酸（LAC）浓度：≤5.0mmol/L（参照GB/T21709.2）

• 丙二醛（MDA）含量：≤1.0nmol/mg（参照ISO14644-1）
• 钙泵（Ca²⁺-ATPase）活性：≥0.5μmol/mg·min（参照ASTMF2315）
• 钠离子-钾离子泵（Na⁺/K⁺-ATPase）活性：≥0.3μmol/mg·min（参照GB/T19001）

• caspase-3活性：≤0.5U/mg（参照ISO10993-10）
• Bax/Bcl-2比值：≤1.0（参照ASTMF2471）
• 凋亡细胞比例：AnnexinV/PI双染，≤10%（参照GB/T16886.6）

• 心肌条收缩力：≥2.0g（参照ISO13485）
• 收缩速度（+dF/dt）：≥100g/s（参照ASTMF2526）
• 舒张速度（-dF/dt）：≥80g/s（参照GB/T21709.3）

• 超氧化物歧化酶（SOD）活性：≥200U/mg（参照ISO10993-11）
• 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性：≥50U/mg（参照ASTMF2602）
• 活性氧（ROS）水平：DCFH-DA荧光强度≤1.2倍对照（参照GB/T16886.7）

• 肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量：≤100pg/mg（参照ISO10993-8）
• 白细胞介素-6（IL-6）含量：≤50pg/mg（参照ASTMF2739）
• 细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达：Westernblot灰度值≤1.5倍对照（参照GB/T19001）

• 心肌细胞排列紊乱率：≤20%（参照ISO12871）
• 肌节完整性：Z线清晰率≥80%（参照ASTMF2864）
• 间质水肿程度：HE染色，水肿面积≤15%（参照GB/T21709.4）

• 心肌特异性基因（α-MHC、cTnI）mRNA相对表达量：≥0.8倍对照（参照ISO15189）
• 凋亡相关基因（p53、Fas）mRNA相对表达量：≤1.2倍对照（参照ASTMF3006）
• 代谢相关基因（GLUT4、CD36）mRNA相对表达量：≥0.7倍对照（参照GB/T19495.1）

• 钠离子（Na⁺）浓度：135-145mmol/L（参照ISO10303-22）
• 钾离子（K⁺）浓度：3.5-5.5mmol/L（参照ASTMF3169）
• 钙离子（Ca²⁺）浓度：1.1-1.3mmol/L（参照GB/T19495.2）

• 二甲基亚砜（DMSO）残留量：≤0.1%（参照ISO10993-7）
• 甘油（Glycerol）残留量：≤0.5%（参照ASTMF3268）
• 丙二醇（PG）残留量：≤0.2%（参照GB/T16886.12）

检测范围

1.新鲜心肌组织：未经过低温处理的正常心肌组织，重点检测baseline活力与代谢指标

2.低温保存心肌组织（4℃/24h）：4℃冰箱保存24小时的心肌组织，重点评估短期低温对活力的影响

3.冷冻保存心肌组织（-80℃/1个月）：-80℃超低温冰箱保存1个月的心肌组织，重点检测长期冷冻后的活力恢复率

4.玻璃化冻存心肌组织：采用玻璃化液处理后液氮保存的心肌组织，重点评估冻存损伤与复苏后功能

5.心肌细胞悬液（原代培养）：原代分离培养的心肌细胞悬液，重点检测细胞层面的活力与凋亡

6.心肌组织工程支架：搭载心肌细胞的组织工程支架，重点评估支架内细胞的活力与功能

7.低温保存心脏移植供体：心脏移植中低温保存的供体心脏，重点检测心肌收缩功能与代谢水平

8.缺血再灌注损伤心肌模型：缺血再灌注处理后的心肌组织，重点评估低温保存对损伤的缓解作用

9.转基因心肌组织：携带特定基因的心肌组织，重点检测基因表达对低温保存的影响

10.心肌细胞株（H9c2）：大鼠心肌细胞株，重点用于低温保存策略的优化研究

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5:2017医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验（用于细胞存活率、LDH漏出率检测）
• ASTMF2149-16组织工程医疗产品细胞活力检测（用于线粒体膜电位、ATP含量检测）
• ISO13485:2016医疗器械质量管理体系用于法规的要求（用于试验流程规范与质量控制）
• ASTMF2471-19组织工程医疗产品凋亡检测（用于caspase-3活性、Bax/Bcl-2比值检测）
• ISO12871:2011组织工程术语与定义（用于组织形态学观察的指标定义）

• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验（与ISO10993-5相比，增加了对中国仓鼠卵巢细胞（CHO）的推荐，适用于本土细胞株的毒性检测）
• GB/T21709.1-2008医用成像磁共振设备第1部分：安全要求（与ASTMF2149相比，更侧重磁共振成像设备的安全操作规范，用于心肌结构的无创检测）
• GB/T19001-2016质量管理体系要求（与ISO13485相比，更强调企业整体质量管理，用于试验过程的全面管控）
• GB/T16886.6-2015医疗器械生物学评价第6部分：植入后局部反应试验（与ASTMF2471相比，增加了植入后局部炎症反应的评估，适用于组织工程支架的长期检测）
• GB/T21709.4-2015医用成像磁共振设备第4部分：性能要求（与ISO12871相比，更侧重磁共振成像的性能指标，用于心肌形态学的高精度检测）

检测设备

1.细胞活力分析仪：BeckmanCoulterVi-CellXR（检测速度≥1000细胞/秒，存活率分辨率±1%，支持自动聚焦与细胞计数）

2.线粒体膜电位检测仪：ThermoFisherVarioskanLUX（荧光通道：Ex585/Em590nm、Ex488/Em530nm，检测灵敏度≤0.1nmol/L，支持多通道同时检测）

3.高速冷冻离心机：Eppendorf5810R（最大转速15000rpm，温度范围-10℃~40℃，离心力≥20000×g，用于细胞分离与上清液提取）

4.酶标仪：Bio-TekSynergyH1（光吸收范围0.001-4.000OD，荧光灵敏度≤1pmol/L，支持终点法、动力学法检测）

5.Westernblot系统：Bio-RadChemiDocXRS+（分辨率≥500dpi，动态范围≥4.5log，支持化学发光与荧光检测）

6.磁共振成像仪：SiemensMagnetomAera（1.5T磁场强度，空间分辨率≤0.5mm，支持T1、T2加权成像与功能成像）

7.流式细胞仪：BDFACSCantoII（检测通道≥4个，分辨率≤2%CV，支持AnnexinV/PI双染与细胞周期分析）

8.心肌收缩力测定系统：DMTMyoCam（收缩力测量范围0-5g，分辨率≤0.01g，支持实时收缩曲线记录）

9.离子色谱仪：DionexICS-5000+（检测限≤0.01μmol/L，重复性≤0.5%RSD，用于Na⁺、K⁺、Ca²⁺浓度检测）

10.倒置荧光显微镜：OlympusIX73（放大倍数10×-100×，荧光通道≥3个，支持活细胞成像与Z-stack扫描）

11.实时定量PCR仪：AppliedBiosystemsStepOnePlus（检测灵敏度≤10copies/μL，重复性≤0.5%CV，支持荧光探针与SYBRGreen检测）

12.超低温冰箱：ThermoFisherRevcoUxFreezer（温度范围-86℃~-40℃，容量≥500L，支持温度报警与远程监控）

13.生物安全柜：EscoClassIITypeA2（风速0.5m/s±0.05m/s，过滤效率≥99.99%，用于细胞操作与无菌处理）

14.冷冻干燥机：ChristAlpha1-4LDPlus（冷凝温度≤-55℃，真空度≤0.1mbar，用于心肌组织的冻干保存）

15.电子天平：MettlerToledoXS205（量程220g，精度≤0.01mg，用于试剂称量与样品制备）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器 资质