心肌组织线粒体膜电位变化实验验证

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

膜电位基础参数：

• 静息电位检测：荧光强度比值（590/530nm≥1.5），震荡频率（≤0.05Hz）
• 去极化动力学：半衰期（t1/2≤180s），恢复速率（≥3mV/s）

• 活性氧产量：超氧阴离子（O2•-）通量（≥50nmol/min/mg），过氧化氢（H2O2）累积量（≥5μM）
• 抗氧化能力：谷胱甘肽还原酶活性（GR≥15U/mg），SOD清除率（≥75%）

• 线粒体钙库：钙绿素荧光强度（激发/发射485/535nm），负荷临界值（≥250μM）
• 通道状态：mPTP开放概率（孔径≥1.5nm），VDAC磷酸化率（≥40%）

• ATP合成：ATP产量（≥8μmol/g组织），合成酶活性（F0F1-ATPase≥120U/mg）
• 呼吸链功能：复合体IV活性（细胞色素c氧化≥0.8ΔOD/min/mg），质子漏（≥15%）

• 磷脂组分：心磷脂含量（≥15μg/mg），磷脂酰乙醇胺/磷脂酰胆碱（PE/PC≤0.35）
• 膜流动性：DPH偏振值（P≥0.28），微粘度（η≥2.1cP）

• 凋亡因子释放：细胞色素c胞质浓度（≥60ng/mg），AIF核转位率（≥30%）
• Caspase激活：Caspase-3活性（DEVD-pNA水解≥2.0nmol/min/mg）

• 抑制剂效应：环孢素A阻断浓度（IC50≤0.5μM），鱼藤酮抑制率（≥90%）
• 激动剂阈值：ADP激活量（EC50≤35μM）

• 缺血再灌注：电位衰减率（≥25%/min），不可逆损伤率（≥40%）
• 心力衰竭：电位振荡幅度（变异系数≥18%）

• 线粒体基质：Rh123滞留时间（≥45min）
• 嵴结构：TMRE聚焦度（半峰宽≤0.8μm）

• 低温保护：25℃维持时间（ΔΨm保留≥85%/2h）
• 热休克效应：HSP70表达量（≥3倍基线）

检测范围

1.正常心肌组织：成年哺乳动物心室肌，检测基础膜电位稳定性及钙缓冲能力

2.缺血再灌注模型：离体心脏Langendorff灌注系统，重点验证再灌注阶段电位崩溃阈值

3.药物毒性心肌：阿霉素诱导损伤模型，监测mPTP持续性开放特征

4.遗传修饰心肌：ANT1基因敲除组织，分析复合体V解耦联效应

5.糖尿病心肌病：高糖培养心肌细胞，聚焦晚期糖基化产物对膜流动性影响

6.肥厚性心肌：主动脉缩窄模型，检测电位振荡频率异常

7.衰老心肌细胞：老年动物（≥24月龄）线粒体，测定心磷脂氧化率（≥50%）

8.线粒体移植模型：外源性线粒体整合效率，验证膜电位同步化程度

9.三维心肌微组织：类器官电传导同步性，检测区域电位梯度差（≤5mV）

10.冷冻复苏心肌：深低温保存样本，评估复温后电位恢复延迟时间

检测方法

国际标准：

• ISO10993-22:2017医疗器械生物学评价-第22部分：纳米材料线粒体毒性试验
• ASTMF2312-11细胞活性荧光检测标准指南（JC-1法）

• GB/T39730-2020细胞线粒体膜电位检测技术规范（流式细胞术）
• GB/T41915-2022纳米材料线粒体功能评估方法（共聚焦显微术）

检测设备

1.激光共聚焦显微镜：LSM980withAiryscan2（405/488/561/640nm四激光器，时间分辨率50ms）

2.流式细胞仪：CytoFLEXSLX（5激光18色检测，荧光灵敏度<50MESF）

3.荧光微板读数仪：SpectraMaxi3x（双光栅单色器，波长范围200-850nm）

4.膜片钳系统：AxonMultiClamp700B（噪声水平<0.5pARMS，采样率500kHz）

5.活细胞工作站：OlympusIXploreSpinSR（环境控制精度±0.1℃/±0.1%CO2）

6.超分辨显微镜：NikonN-STORM（定位精度10nm，3D重构层厚200nm）

7.ATP生物发光仪：PromegaGloMaxExplorer（检测限0.1pmolATP）

8.氧耗分析系统：SeahorseXFe96（氧传感器分辨率<1mmHg）

9.钙离子成像系统：HamamatsuORCA-FusionBT（量子效率95%@500nm）

10.低温恒温器：LeicaCM1950（切片厚度精度±0.5μm）

11.蛋白质印迹仪：Bio-RadChemiDocMP（动态范围8个数量级）

12.离心浓缩仪：EppendorfVacufugePlus（真空度<10mbar）

13.显微注射系统：EppendorfFemtoJet4i（注射压力精度0.1hPa）

14.荧光寿命仪：PicoQuantFluoTime300（时间分辨率25ps）

15.电穿孔装置：BTXECM830（脉冲参数0-3000V/0-99ms）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器 资质