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菌株原始种子RNA完整性测试

2025-07-11 关键词:菌株原始种子RNA完整性测试测试机构,菌株原始种子RNA完整性测试测试案例,菌株原始种子RNA完整性测试测试范围 相关:
菌株原始种子RNA完整性测试

菌株原始种子RNA完整性测试摘要:本文聚焦于菌株原始种子RNA完整性测试,核心检测对象为微生物菌株保藏中原始种子的RNA分子完整性,确保其在存储、传代及使用过程中的稳定性和功能可靠性。关键技术项目包括RNA完整性指数(RIN)、28S/18S比值降解评估、A260/A280纯度比值分析等,通过全面检测RNA结构完整性、污染物残留及功能性表达指标,保障微生物遗传资源的生物活性与一致性。

参考周期:常规试验7-15工作日,加急试验5个工作日。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

RNA纯度检测:

  • 吸光度比值:A260/A280(纯度≥1.8)、A260/A230(污染物残留≤2.0)
  • 核酸浓度:总RNA含量(μg/μL,检测限0.1ng/μL)
RNA完整性评估:
  • 完整性指数:RIN值≥7.0(参照ISO20391-2)、28S/18S比值≥1.5
  • 降解片段分析:降解梯度(5S峰占比≤15%)
污染物检测:
  • 蛋白质残留:BCA法检测(含量≤0.1μg/μL)
  • 溶剂残留:乙醇残留量(≤0.01%,气相色谱法)
浓度测定:
  • 紫外分光法:RNA浓度(范围1ng/μL-1mg/μL,精度±5%)
  • 荧光定量法:低浓度检测(检测限0.01ng/μL)
降解产物分析:
  • 小片段检测:<200nt片段占比(≤10%)
  • 氧化损伤:8-羟基鸟嘌呤含量(≤0.05pmol/μg)
序列特异性验证:
  • RT-PCR扩增:产物片段长度(目标基因≥200bp,Ct值≤30)
  • 序列比对:一致性≥99.9%(参照NCBI数据库)
稳定性测试:
  • 热稳定性:40°C加速老化后RIN变化(下降≤10%)
  • 冻融循环:三次循环后完整性保留率(≥90%)
功能性测试:
  • 体外翻译效率:报告蛋白表达量(≥80%对照)
  • 酶活性检测:逆转录效率(≥95%)
微生物污染检测:
  • 内毒素含量:LAL法(≤0.1EU/μg)
  • 细菌DNA残留:qPCR检测(拷贝数≤10/μg)
存储条件影响评估:
  • 低温保存:-80°C下长期稳定性(RIN≥6.0,12个月)
  • 干燥处理:冻干后复水完整性(下降≤15%)

检测范围

1.细菌原始种子:涵盖大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性/阴性菌种,检测重点为RNA在传代过程中的降解速率与功能表达稳定性

2.真菌原始种子:酿酒酵母、黑曲霉等丝状真菌菌株,侧重RNA提取物中多糖污染物去除与完整性指数评估

3.病毒种子:流感病毒、腺病毒等疫苗株,重点检测RNA包装完整性与反转录活性验证

4.重组菌株:转基因工程菌如毕赤酵母,检测重组基因RNA表达水平与序列特异性

5.细胞株种子:哺乳动物细胞系如HEK293,聚焦RNA在单克隆筛选中的完整性维护

6.疫苗株种子:减毒活疫苗株如脊髓灰质炎病毒,检测RNA稳定性和无病原残留

7.发酵菌株:工业发酵用乳酸菌、放线菌,重点评估RNA在发酵环境中的热稳定性

8.环境样品菌株:土壤或水体分离菌种,检测RNA提取物中腐殖酸污染物影响

9.转基因生物种子:基因编辑作物微生物关联株,侧重RNA沉默效率与降解产物分析

10.病原体库种子:高致病性菌株如结核分枝杆菌,检测RNA在生物安全条件下的完整性保障

检测方法

国际标准:

  • ISO20391-2:2023细胞生物样本RNA完整性测试(包含凝胶电泳法RIN计算)
  • ISO17205:2020核酸污染物检测规程(微流体芯片法)
  • ISO21571:2019食品微生物RNA提取方法(离心柱纯化差异)
国家标准:
  • GB/T37871-2023微生物菌种RNA完整性检测通则(要求毛细管电泳替代凝胶法)
  • GB/T34796-2017病毒种子RNA功能测试方法(qPCR参数设定差异)
  • GB/T30988-2014生物样本RNA纯度测定(紫外分光法与国际荧光法灵敏度差异)
方法差异说明:国际标准ISO20391-2优先使用微流体系统计算RIN,而国家标准GB/T37871-2023采用毛细管电泳法,在分辨率上差异为±5%;ISO17205:2020允许直接PCR检测污染物,GB/T30988-2014则要求预处理步骤增加回收率控制

检测设备

1.紫外分光光度计:ND-1000型(波长范围190-840nm,精度±0.001OD)

2.凝胶电泳系统:GDS-8000型(分辨率0.1-10kb,电压范围50-150V)

3.毛细管电泳仪:CE-2100型(灵敏度0.1ng/μL,毛细管长度30cm)

4.实时荧光定量PCR仪:QRT-500型(温度精度±0.1°C,检测通道6个)

5.微流体分析平台:MF-110型(芯片孔径5μm,通量12样本/批次)

6.离心机:CF-16型(转速范围500-16000rpm,温控±1°C)

7.核酸提取工作站:NE-900型(自动化程度99%,处理量96孔)

8.冷冻干燥机:FD-100型(真空度0.1mbar,温度-80°C至25°C)

9.恒温培养箱:IC-200型(温度范围4-60°C,均匀度±0.5°C)

10.气相色谱仪:GC-3000型(检测限0.001ppm,柱温范围40-300°C)

11.荧光显微镜:FM-400型(放大倍数1000X,激发波长488nm)

12.酶标仪:EM-600型(吸光度范围0-4OD,波长精度±1nm)

13.生物安全柜:BSC-100型(气流速度0.5m/s,洁净度Class100)

14.低温储存罐:LS-500型(温度-196°C,容量500L)

15.振荡培养器:OC-150型(转速50-300rpm,温控精度±0.2°C)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

中析仪器 资质

中析菌株原始种子RNA完整性测试 - 由于篇幅有限,仅展示部分项目,如需咨询详细检测项目,请咨询在线工程师

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