病毒载体滴度空斑形成单位测定

参考周期：常规试验7-15工作日，加急试验5个工作日。

注意：因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

检测项目

病毒滴度测定：

• PFU计数：每毫升空斑形成单位（范围10^3-10^9PFU/mL，参照ISO15189:2022）
• 空斑形态分析：平均直径（μm）、分布均匀性
• 稀释系列优化：对数稀释梯度（10倍稀释）

• 宿主蛋白残留：≤50ng/剂（中国药典2020版通则1107）
• DNA残留水平：≤10ng/剂
• 内毒素含量：<0.5EU/mL

• 感染复数（MOI）：优化值0.1-10
• 细胞病变效应（CPE）评分：病变程度分级

• 热稳定性：37°C孵育时间（小时）
• 冻融循环耐受性：循环次数（≥3次）

• 无菌测试：无微生物生长
• 复制能力检测：无复制信号

• 插入序列完整性：PCR验证
• 载体基因组拷贝数：qPCR测定

• 细胞汇合度：80-90%
• 培养基pH控制：7.2-7.4

• 染色技术：结晶紫浓度（0.1%-0.5%）
• 显微镜放大参数：物镜放大倍数（100-400x）

• 滴度计算公式：PFU/mL=(空斑数×稀释因子)/接种体积
• 统计参数：变异系数CV≤15%

• 阳性对照设置：标准病毒株PFU验证
• 阴性对照验证：无空斑形成

检测范围

1.重组腺病毒载体：用于基因治疗传递，检测重点在滴度高精度和宿主残留物控制

2.慢病毒载体：长期表达载体，侧重整合效率和安全评估

3.腺相关病毒（AAV）载体：视网膜疾病应用，监控血清型特异性和低免疫原性

4.逆转录病毒载体：造血干细胞工程，测定遗传稳定性和感染效率

5.溶瘤病毒：癌症治疗载体，关注肿瘤细胞特异性和复制能力验证

6.疫苗载体：如病毒载体疫苗，批次一致性检测和纯度验证

7.研究用病毒载体：实验室规模载体，侧重快速检测和参数优化

8.商业化生产批次：GMP环境下载体，全面安全性和稳定性测试

9.新型合成载体：病毒样颗粒类，验证无感染性和空斑形成能力

10.动物模型载体：体内应用前载体，预测试生物分布和滴度衰减

检测方法

国际标准：

• ISO15189:2022医学实验室质量和能力要求
• WHOTRS1011病毒疫苗检测指南
• USP<71>无菌测试标准方法

• 中国药典2020版通则1107病毒滴度测定方法
• GB/T37869-2019基因治疗载体检测规范
• YY/T1743-2021生物制品内毒素检测

检测设备

1.倒置显微镜：OlympusIX73型（分辨率0.2μm，10x/40x物镜）

2.CO2培养箱：ThermoScientificHeracell150i（温度范围RT+5°C-50°C，CO2控制0.1-20%）

3.生物安全柜：EscoAirstreamAC2-4S1（HEPA过滤效率99.99%，风速0.3-0.5m/s）

4.精密移液器：EppendorfResearchplus（精度±0.5%，体积范围0.1-1000μL）

5.自动细胞计数器：CountessIIFL（检测限1x10^4-1x10^7细胞/mL）

6.ELISA仪器：BioTekSynergyH1（波长范围200-999nm，精度±0.005Abs）

7.实时PCR仪：AppliedBiosystems7500（温度均匀性±0.5°C，通道数6）

8.高速离心机：EppendorfCentrifuge5430R（最大转速15000rpm，容量6x50mL）

9.超低温冷冻箱：ThermoScientificForma-80°C（温度稳定性±3°C，容量700L）

10.图像分析系统：ImageJ软件（空斑计数模块，兼容Windows/Mac）

11.无菌检测系统：MilliporeMilliflex（膜孔径0.22μm，检测时间24-72小时）

12.内毒素检测仪：CharlesRiverEndosafePTS（检测限0.005EU/mL，响应时间15min）

13.流式细胞仪：BDAccuriC6（激光波长488nm，流速12μL/min）

14.恒温水浴锅：MemmertWNB14（精度±0.1°C，容量14L）

15.分析天平：MettlerToledoXS205（精度0.01mg，最大称量220g）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

中析仪器 资质